当ELISA试剂盒同一批次提取蛋白跑出的条带不一致

ELISA试剂盒每次提蛋白后会将样品在短时刻内重复2-3次WB，可是每次跑出的条带趋势不共同，上样量和其他条件都没有变，内参根本是规整安稳的，不知道为什么意图条带就是不共同？
首要内参安稳阐明上样量安稳（应该大致是一样的），所以不存在什么上样量不一样的问题；呈现这样的成果，问题出在每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。但据我所知，WBzui要害的仍是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时分敷的不均匀。我的主张是你再认认真真，仔仔细细做几遍，很可能重复性就做出来了。仅仅个人观点。  
ELISA试剂盒根本操作的问题我们没必要去考虑。我认为问题的要害在于成像的进程。同一张膜，本人能够在成像的时分，做出*不同的图片成果。显色液的滴加，量，以及曝光时刻，条带色彩（要求灰色而不是黑色）。所以有图片阐明问题。  
说是内参共同，而意图条带每次都不一样，我想说原因可能是在显影液环节，简单来说就是你的膜没有淋洁净，上面残留参差不齐的T/TBS，T/TBS能稀释显影液，意图条带正本表达量就少，某一个点残留的T/TBS略微多一点就可能导致显影作用下降，所以主张在显影液反响前，尽量将膜上的洗膜液淋掉（当然也不能让膜干了，要是实验室富裕的话，也能够多添点显影液，作用一样），期望对你有协助。  
可能触及几个原因：1，拔梳子时胶错动，参加样本后进入其他孔或漏出。由于内参表达高，可能不会显示出差异。2，参加样本时不均匀也可能会发生差错。3，制胶应确保均匀无气泡，玻璃板洁净，这样才干确保成果共同牢靠。
ELISA试剂盒尽管用WB做出一张满足的成果触及多个环节,但向上面你说到的内参没有问题,阐明各项操作根本是过关的,据我猜想很可能是zui终一步曝光呈现的问题,加发光液反响的时刻及曝光的时刻都会对zui终的成果发生影响, 还有一种可能你的发光液的安稳性或许不太好,期望对你有所协助,哪里说的不对也请多指导.