研域跟你详谈ELISA夹心法中抗体质量的重要性（请猛戳）

理论上运用*挑选的亲和纯化抗体可得到高特异性，高敏感度的免疫测定。但是，由于经济原因或是缺乏适宜的试剂，使得许多工作者采用低纯度的制品，这种试剂一般含有与试验中其它成分起交叉反响的抗体。现已发现在用抗人IgG抗血清的抗体时，抗体中含有不需要的抗体交叉反响。但当运用亲和纯的抗血清时，交叉反响不明显。

研讨任何ELISA系统，为了控制不需要的交叉反响，就要不吝运用亲和纯试剂。运用抗IgG血清抗体作为包被抗体，有时本底确实很低，但它的敏感度比仅运用亲和纯制品要低50-100倍。在高敏感度的试验中使用关闭试剂是很重要的。zui终挑选非亲和纯抗IgG血清抗体是根据这样设想：包被抗体或是结合的人IgG（抗原）与指示抗体有交叉反响，则过量的与指示抗体同种动物的血清，就可以关闭与酶标抗体的不要的结合。但是人血清白蛋白中含有少数的IgA和IgG会干扰检测。人血清白蛋白只适用于IgE的测定。同样，不能用牛血清白蛋白。由于其间含有微量的牛IgG。

抗血清抗体与亲和纯抗体对ELISA夹心法成果的影响可从下面试验看出：

试验A：包被抗体为粗制的绵羊抗人IgG抗体，指示抗体（检抗）为粗制山羊抗人IgG抗体

试验B：包被抗体为亲和纯的绵羊抗人IgG抗体，指示抗体（检抗）为粗制山羊抗人IgG抗体

试验C：包被抗体为粗制的绵羊抗人IgG抗体，指示抗体为亲和纯的山羊抗人IgG抗体

试验D：包被抗体和指示抗体都是亲和纯的兔抗人IgG抗体。

试验中运用5%血清（与指示抗体同物种来历）进行关闭，其他夹心法ELISA步骤相同。
                   
成果显现，当粗制的抗IgG血清抗体被用在夹心法的两头（如试验a曲线）时，本底很高且曲线坡度不明显。虽然能成功使用此抗体类型，但问题是一种抗体结合另一种抗体。可能发生了山羊指示抗体结合了绵羊包被抗体，由于稀释液中的山羊血清过剩也不能下降本底值。当使用亲和纯化的包被抗体时（如试验b曲线），本底恰当下降而且形成了规范曲线。但是，大多数工作者认为本底仍偏高，工作范围有限（2-60ng/ml）。当亲和纯的指示抗体与粗制包被抗体联合运用时（如试验c曲线），本底大大较低，但敏感度约为100-200ng/ml，再者工作范围仍受限。当*运用亲和纯的抗体时（如试验d曲线），本底低，敏感度大大改进且工作范围广（2-500ng/ml）。