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检测植物elisa试剂盒操作步骤
发布时间： 2021-09-24 点击次数： 1961次检测植物试剂盒操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 a50μl，再加入显色剂 b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（od 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00 阴性对照平均值≤0.10
临界值（cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值 0.15
阴性判定：样品 od 值< 临界值（cut off）者为金葡萄球菌肠毒素(se)阴性 阳性判定：样品 od 值≥ 临界值（cut off）者为金葡萄球菌肠毒素(se)阳性。
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