人ELISA试剂盒操作步骤

人ELISA试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔，在一、 二孔中分别加标准品100ul，然后在一、二孔中加标准品稀释液50ul，混匀; 然后从一孔、二孔中各取100ul分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50ul，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50ul弃掉，再各取50ul分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50ul分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50u，混匀后从第七、第八孔中分别取50ul加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μ，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240pg/ml，160pg/ml，80pg/ml，40pg/ml，20pg/ml)。

2. 加样: 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40ul，然后再加待测样品10ul(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育: 用封板膜封板后置37°℃温育30分钟。

4. 配液: 将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

5. 洗涤: 小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶: 每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外。

7. 温育: 操作同3。

8. 洗涤: 操作同5。

9. 显色: 每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.以内进行。

10. 终止: 每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定: 以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟。

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