上海研域生物操作常见细胞培养实验

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细胞系（cell line）指原代细胞培养物经传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。（由此便引申出了后来的有限细胞系（FiniteCellLine）、无限细胞系（InfiniteCellLine）），因此，细胞系狭义的是指可连续传代的细胞（特定环境下口语和书面语都使用），广义是指可传代的细胞。

细胞传代：

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000rpm离心5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

复苏细胞：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4mL培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心3min，弃去上清液，加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

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